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Las proteínas se encuentran solvatadas en agua debido a las interacciones entre sus grupos polares y con las moléculas de agua. Algunas muestras proteicas como el plasma son frecuentemente analizadas para determinar pequeñas drogas y sus correspondientes metabolitos, utilizando la técnica conocida como Precipitación de Proteínas (PPT).

La PPT es útil para la limpieza de diferentes tipos de matrices en industrias como la alimentaria, y de las bebidas, así como también en la industria bioanalítica entre otras.

Se puede llevar a cabo con solventes orgánicos, ácidos fuertes o sales, forzando a las proteínas a desnaturalizarse y asociarse con otras en vez de permanecer en disolución.

La precipitación permite eliminar selectivamente la proteína de una muestra o reducir la interacción de una molécula pequeña con una proteína de unión en el plasma, como la vitamina D.

Las empresas farmacéuticas analizan diferentes tipos de plasma (perros, ratas, humanos y mono) mediante la técnica de PPT, o combinada con la extracción en fase sólida (SPE), para posteriormente pasar a la técnica analítica que utilicen en su laboratorio.

Aunque la PPT es menos selectiva para la limpieza y requiere la dilución de la muestra, es también simple, rápida y menos costosa que la SPE.

A continuación, comentaremos los métodos.

PPT, Resumen del Método

Precipitación basada en agentes Orgánicos:

– Ideal para SPE de intercambio iónico, normalmente no se requiere dilución.
– Válido para SPE de carga neutra; Se requiere dilución para eliminar la fuerza del solvente orgánico antes de cargarlo en el SPE.

Mejor Solvente: Acetonitrilo

1. Añade la proporción de ≥ 2:1 de disolvente orgánico para muestras de plasma.
2. Agita la muestra para que la proteína precipite de la solución; centrifuga para conseguir un pellet y elimina el sobrenadante para el análisis o usa una placa-filtro de alto rendimiento.

Precipitación basada en disolventes Acuosos.

– Ideal para SPE de carga Neutra
– Compatible para SPE de Intercambio Iónico; Se requiere el ajuste del pH o la concentración de sales antes de cargarlo en el SPE.

Mejor Solvente: 20% TCA en Agua.

1. Añade la proporción de ≥2:1 de disolvente acuoso a la muestra de plasma.
2. Agita la muestra para que la proteína precipite de la solución; centrifuga hasta conseguir un pellet y elimina el sobrenadante para su análisis o utiliza una placa-filtro de alto rendimiento.

Solvente Extra Sulfato de Zinc

1. Añade la proporción de ≥2:1 de disolvente de precipitación a la muestra de plasma.
2. Agita la muestra para que la proteína precipite de la solución; centrifuga hasta conseguir un pellet y elimina el sobrenadante para su análisis o utiliza una placa-filtro de alto rendimiento

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