protein precipitation

Los científicos no son perfectos, nadie lo es. En nuestros Consejos Técnicos pretendemos resolver sus problemas más cruciales en un sólo consejo, desde los mecanismos hasta la metodología.

Las proteínas se encuentran solvatadas en agua debido a las interacciones entre sus grupos polares y con las moléculas de agua. Algunas muestras proteicas como el plasma son frecuentemente analizadas para determinar pequeñas drogas y sus correspondientes metabolitos, utilizando la técnica conocida como Precipitación de Proteínas (PPT).

La PPT es útil para la limpieza de diferentes tipos de matrices en industrias como la alimentaria, y de las bebidas, así como también en la industria bioanalítica entre otras.

Se puede llevar a cabo con solventes orgánicos, ácidos fuertes o sales, forzando a las proteínas a desnaturalizarse y asociarse con otras en vez de permanecer en disolución.

La precipitación permite eliminar selectivamente la proteína de una muestra o reducir la interacción de una molécula pequeña con una proteína de unión en el plasma, como la vitamina D.

Las empresas farmacéuticas analizan diferentes tipos de plasma (perros, ratas, humanos y mono) mediante la técnica de PPT, o combinada con la extracción en fase sólida (SPE), para posteriormente pasar a la técnica analítica que utilicen en su laboratorio.

Aunque la PPT es menos selectiva para la limpieza y requiere la dilución de la muestra, es también simple, rápida y menos costosa que la SPE.

A continuación, comentaremos los métodos.

PPT, Resumen del Método

Precipitación basada en agentes Orgánicos:

– Ideal para SPE de intercambio iónico, normalmente no se requiere dilución.
– Válido para SPE de carga neutra; Se requiere dilución para eliminar la fuerza del solvente orgánico antes de cargarlo en el SPE.

Mejor Solvente: Acetonitrilo

  1. Añade la proporción de ≥ 2:1 de disolvente orgánico para muestras de plasma.
  2. Agita la muestra para que la proteína precipite de la solución; centrifuga para conseguir un pellet y elimina el sobrenadante para el análisis o usa una placa-filtro de alto rendimiento.

Precipitación basada en disolventes Acuosos.

– Ideal para SPE de carga Neutra
– Compatible para SPE de Intercambio Iónico; Se requiere el ajuste del pH o la concentración de sales antes de cargarlo en el SPE.

Mejor Solvente: 20% TCA en Agua.

  1. Añade la proporción de ≥2:1 de disolvente acuoso a la muestra de plasma.
  2. Agita la muestra para que la proteína precipite de la solución; centrifuga hasta conseguir un pellet y elimina el sobrenadante para su análisis o utiliza una placa-filtro de alto rendimiento.

Solvente Extra Sulfato de Zinc

  1. Añade la proporción de ≥2:1 de disolvente de precipitación a la muestra de plasma.
  2. Agita la muestra para que la proteína precipite de la solución; centrifuga hasta conseguir un pellet y elimina el sobrenadante para su análisis o utiliza una placa-filtro de alto rendimiento

Para cualquier pregunta relacionada con PPT, contacta con nosotros en

SamplePrepSupport@phenomenex.com.


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