Autor invitado: James Turner, Especialista técnico
La Extracción de fase sólida (Solid phase extraction, SPE) se selecciona habitualmente como técnica de preparación de las muestras antes del análisis de HPLC y GC. Proporciona limpieza, preconcentración de analitos y cambio de solvente. Esto funciona bien para cualquier muestra líquida homogénea, pero por supuesto una muestra sólida no puede aplicarse directamente a un dispositivo de SPE. A continuación, consideraremos el mejor enfoque más apropiado para el pretratamiento de muestras sólidas antes de la SPE.
La primera fase del proceso previo al tratamiento de muestras sólidas implica homogenizar la muestra con un solvente adecuado. El solvente seleccionado para este propósito:
- Será eficaz en la solubilización del analito
- Será eficaz en la solubilización de la matriz de muestras, aunque esto no es necesario siempre que la muestra se mezcle bien con el solvente.
- Idealmente, será un solvente débil cuando se trata de la etapa de la SPE. Esto puede no ser posible, y puede ser necesario secar y reconstituir la muestra antes de cargarla en el cartucho de SPE.
Tras formar una suspensión de la muestra en un solvente adecuado, se debe utilizar un mezclador para favorecer una mezcla exhaustiva y luego se debe centrifugar para precipitar los componentes insolubles de la matriz. A continuación, se debe eliminar el solvente para continuar el tratamiento.
En este punto, es necesario seleccionar el mecanismo de la SPE (utilice la siguiente tabla como referencia):
En este punto deben tenerse en cuenta las propiedades de analitos y el diluyente de las muestras. Las extracciones de fase reversa son efectivas para los analitos moderadamente tóxicos a moderadamente hidrofóbicos, pero solo si se disuelven en un solvente débil como el agua. Si la muestra se disuelve en un solvente medio-polar, será necesario diluir la muestra o bien secarla y reconstituirla. Lo mismo ocurre en la fase normal, en la cual las muestras se deben disolver en hexano/heptano para que los analitos se conserven satisfactoriamente durante la carga de la muestra en el dispositivo de SPE.
Los siguientes ejemplos ilustran este concepto en más detalle.
Extracción de PCB del suelo
Los PBC son hidrofóbicos y se disolverán fácilmente en un solvente no polar. El suelo puede secarse, pesarse y luego extraerse usando hexano (o heptano). Una vez mezclado y centrifugado, la solución resultante se puede aplicar directamente a un tubo de SPE de sílice acondicionado que permita realizar una extracción en fase normal.
Tilosina de la carne
La tilosina es un antibiótico, con un log P de 1,0. La extracción de la carne con una mezcla de acetonitrilo y agua (80:20) romperá las interacciones hidrofóbicas, liberando la tilosina. Después de la centrifugación, la muestra líquida resultante requerirá una dilución adicional con agua para reducir la concentración del solvente de carga antes de una en fase reversa.
Enilconazol de las naranjas
El enilconazol es un fungicida ampliamente utilizado en la agricultura, frecuentemente usado con frutas cítricas. Se puede extraer fácilmente de las naranjas utilizando acetonitrilo. Puesto que el enilconazol es básico, la adición de HCl al extracto de acetonitrilo favorecerá la protonación del analito, lo que permitirá que sea retenido directamente en un material de SPE de intercambio catiónico fuerte. Esto simplifica en gran medida el proceso de extracción, ya que no es necesario diluir la muestra (en contraste con la fase reversa, o la extracción de fase normal en la que el acetonitrilo al 100 % provocaría que el analito no se retuviera durante la carga).
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