A pesar de los avances en los métodos y la tecnología de HPLC, todavía hay problemas que pueden aparecer cuando se utiliza un sistema de HPLC. Siga leyendo para conocer los problemas más comunes de la HPLC y cómo solucionarlos.
Problemas de presión de HPLC
Los principales problemas con la presión son los siguientes:
- La presión anómala, que generalmente significa que no hay flujo por falta de energía, se produce cuando hay una fuga o aire atrapado en la cabeza de la bomba, hay un problema con el ajuste del regulador o un pistón está roto. Si hay flujo y presión, es posible que se deba reemplazar el medidor o el transductor de presión.
- La contrapresión elevada la suele causar un caudal demasiado elevado. También puede deberse a la obstrucción de la frita de la columna de HPLC, la columna de protección de HPLC, el inyector o el filtro en línea; al uso de una columna de HPLC no adecuada o de una fase móvil no adecuada; a la baja temperatura de la columna o al mal funcionamiento del controlador.
- La baja contrapresión la suele causar un caudal demasiado bajo. El uso de una columna de HPLC inadecuada, el ajuste de la temperatura de la columna a un nivel demasiado alto, una fuga del sistema y un mal funcionamiento del controlador también pueden causar una baja contrapresión.
- Los ciclos de presión pueden deberse a la presencia de aire en la bomba, a válvulas defectuosas, a una fuga del sistema, a un fallo de la junta de la bomba, a una desgasificación insuficiente o al uso de la elución en gradiente.
Problemas de filtración del HPLC
Las filtraciones pueden producirse en cualquier parte del HPLC.
- Las filtraciones en los conectores suelen significar que hay que ajustarlos, limpiarlos o sustituirlos si están pelados o dañados. Otros problemas son el apriete excesivo del accesorio o el uso de piezas de distintos fabricantes.
- Las filtraciones en la bomba pueden deberse a conectores o válvulas sueltas que se deben ajustar. También podría haber un fallo en la junta del mezclador, la junta de la bomba, el amortiguador de impulsos o la válvula dosificadora, en cuyo caso es necesario reparar o sustituir la pieza defectuosa.
- Las fugas en el inyector pueden ser causadas por el uso de una aguja de jeringa con el diámetro incorrecto. Un fallo en el sello del rotor puede provocar filtraciones y requiere su reparación o sustitución. La obstrucción puede producirse en el bucle o en el conducto de residuos, lo que requiere su limpieza o sustitución. Si el sello del puerto del inyector está suelto, debe ajustarse. Pueden producirse fugas debido a la sifonación de la línea de residuos, que puede corregirse con una pendiente adecuada y una línea de residuos que se mantenga por encima de la superficie.
- Las filtraciones en la columna de HPLC pueden ser causadas por un accesorio suelto que necesita un ajuste.
- Las filtraciones en el detector pueden deberse a que los conectores tienen filtraciones y necesitan ajustarse, a que la junta de la célula falla y requiere una reparación o debe cambiarse, a que las ventanas de la célula están agrietadas y necesitan reemplazarse, o a que la línea de residuos o la célula de flujo están bloqueadas y requieren la sustitución de estas piezas.
Problemas cromatográficos de HPLC
Posibles problemas que pueden surgir de las columnas de HPLC
- La cola de los picos se debe a la obstrucción de la frita, al vacío de la columna, a la interacción de la muestra con los sitios activos, a un pico de interferencia, al pH incorrecto de la fase móvil o a una columna que debe reemplazarse.
- El frente del pico debido a la baja temperatura, al uso de un disolvente de muestra incorrecto, a la sobrecarga de la muestra o a una columna defectuosa que debe reemplazarse.
- Picos divididos debido a la contaminación en la entrada de la columna o en el protector o a la incompatibilidad del disolvente de la muestra con la fase móvil.
- Distorsión de los picos grandes debido a la sobrecarga de la muestra.
- Distorsión de los picos pequeños debido al uso de un disolvente de inyección incorrecto.
- Cola de los primeros picos debido a problemas fuera de la columna que requieren una célula detectora de menor volumen o el reemplazo del sistema.
- Cola que aumenta a medida que aumenta k debido a problemas con los efectos secundarios de retención.
- Cola de los picos ácidos o básicos debido a una amortiguación inadecuada.
- Picos adicionales debidos a la presencia de picos fantasma o a un pico de elución tardía de una inyección anterior (arrastre).
- Desviaciones del tiempo de retención debido a un control defectuoso de la temperatura o del equilibrio de la columna o del cambio de la fase móvil.
- El tiempo de retención cambia debido a un cambio en el caudal, una burbuja de aire en la bomba o una fase móvil inadecuada.
- Las derivas de la línea de base se deben a la presencia de contaminantes en la fase móvil, a fluctuaciones en la temperatura de la columna, a un equilibrio lento de la columna, a problemas con la fase móvil, a materiales retenidos firmemente en la muestra o a que el detector no está bien ajustado.
- Ruido de base debido a filtraciones, aire atrapado en el sistema, contaminación, mezcla incompleta de la fase móvil, desgasificación inadecuada de la fase móvil, problemas con el detector, problemas de temperatura, pulsación de la bomba o el uso de otros equipos electrónicos en la misma línea.
- Picos amplios debido a problemas con la fase móvil, filtraciones, contaminación en la columna o en la columna de guarda, problemas de temperatura, baja concentración de tampón, problemas con los ajustes del detector, alta constante de tiempo del detector o un vacío en la entrada de la columna.
- Pérdida de resolución debida a la contaminación de la fase móvil, a la obstrucción de la columna analítica o de protección, o a una columna que debe reemplazarse.
- Picos demasiado pequeños o demasiado grandes debido a problemas con la atenuación del detector, el tamaño de la inyección o una conexión incorrecta del registrador.
Solución de problemas de inyectores de HPLC
Pueden existir problemas con un inyector manual y con un inyector de muestreo automático. Cuando se trata de un inyector manual, el problema suele ser que es demasiado difícil de girar o demasiado difícil de cargar. Si le cuesta mucho girar, es posible que la junta del rotor esté dañada o que el rotor esté demasiado ajustado: sustituya el sello del rotor. Si es demasiado difícil de cargar, puede haber una alineación incorrecta de la válvula, un bloqueo en el bucle o en las líneas, o una jeringa sucia.
El problema más común de un inyector de muestreo automático es que no gira, lo que puede deberse a una falta de potencia o de presión, a una desalineación de la válvula o a un rotor demasiado ajustado. Otros problemas de un inyector de muestreo automático son el bloqueo, un controlador defectuoso o un mecanismo atascado.
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