Autora invitada: Grace Guo, técnica especialista de Phenomenex
Las columnas de exclusión iónica, como la columna Phenomenex Rezex, se utilizaron mucho en el análisis de azúcares y ácidos orgánicos. La fase móvil de base acuosa es ecológica y ayuda a reducir el coste del proceso al evitar el disolvente orgánico. La separación en la columna Rezex se basa en múltiples modos de interacción, incluyendo la exclusión electrostática/iónica, la partición/adsorción y la exclusión por tamaño. Con un 4 % y un 8 % de estireno-divinilbenceno reticulado (SDVB) y múltiples formas iónicas, las columnas de exclusión iónica Rezex proporcionan una amplia gama de selectividad.
Dado que Rezex es una columna basada en polímeros con un mecanismo de separación por exclusión de tamaño, es muy sensible a los cambios de presión. Todas las columnas reticuladas al 8 % tienen una presión máxima de 1000 psi y para las columnas reticuladas al 4 % es de 300 psi. Superar el límite de presión podría hacer chocar las partículas de polímero, lo que daría lugar a una forma de pico más amplia y a un desplazamiento del tiempo de retención. Además, para conseguir el mejor rendimiento y la mayor vida útil de la columna, hay algunos consejos sobre la instalación de la columna de exclusión iónica Rezex.
Para instalar la columna de exclusión iónica, primero debe establecer un flujo bajo (alrededor de 0.1 mL/min) con su fase móvil, y mantener la columna a temperatura ambiente. Instale la columna según la dirección de flujo marcada en la etiqueta de la columna, luego caliente la columna a la temperatura deseada de su método gradualmente. La temperatura máxima para la columna Rezex es de 85 °C. Una temperatura superior al límite máximo podría reducir la vida útil de la columna. Una vez alcanzada la temperatura del método, se puede aumentar gradualmente el caudal hasta alcanzar el caudal del método deseado. Asegúrese siempre de que la columna no supere el límite máximo de presión.
Es posible que vea alguna descarga de color cuando instale la columna por primera vez. Esto es común. Rezex utiliza materiales de poliestireno sulfonado. Algunas fracciones sulfonadas adicionales que se difunden con el tiempo en la columna podrían “exprimirse” a alta presión durante la operación inicial. Es común que haya una descarga de color durante los primeros volúmenes de la columna.
Cuando termine un día de trabajo y quiera apagar el sistema, se recomienda reducir primero el caudal a 0.2 mL/min. A continuación, reduzca la temperatura de la columna de nuevo al nivel ambiente. Tras asegurarse de que la columna esté a temperatura ambiente, se puede detener el flujo y retirar la columna del sistema. Si desea seguir utilizando esta columna al día siguiente, puede dejarla en el sistema y establecer un caudal de 0.1 mL/min durante la noche.
Se podría pensar que la vida útil de la columna de exclusión iónica Rezex no es tan larga como la de una columna de fase inversa como la C18. Sin embargo, si sigue algunos consejos, conseguirá una mayor duración de las columnas Rezex. En primer lugar, asegúrese de no tener ninguna especie cargada en la muestra o en la fase móvil si está utilizando la columna Rezex de forma iónica. El catión que es diferente a la forma iónica de la columna sustituirá a los iones metálicos asociados a la fase, lo que dará lugar a una mala forma del pico y a una selectividad diferente. Además, asegúrese de instalar la columna y apagar el sistema como se propuso anteriormente. La presión debe controlarse todo el tiempo cuando la columna esté en el sistema. Por último, siempre se sugiere filtrar la muestra con un filtro de jeringa antes de la inyección y utilizar un sistema de protección (como SecurityGuard) para proteger la columna analítica.
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