Artículo escrito a partir de una aplicación técnica por: Roxana Eggleston-Rangel, Ryan Splitstone y Jason Anspach, doctor.
La micro LC utiliza columnas con diámetros internos (D.I.) que suelen estar en el rango de 0.3 – 0.5 mm y embaladas con los mismos materiales cromatográficos utilizados en las dimensiones de las columnas analíticas tradicionales. Al igual que en las separaciones de LC a escala analítica, el medio cromatográfico influye en el rendimiento cromatográfico y la selectividad de la separación y puede optimizarse. Una práctica común en micro LC es utilizar un modo de inyección de trampa y elución. El uso de un modo de inyección de trampa y elución permite tanto la disminución significativa del tiempo de inyección como la protección de la columna de la contaminación de la muestra. Las trampas de micro LC pueden influir en la recuperación y en los analitos de la muestra en función de la química de la fase estacionaria elegida.
En este artículo, investigamos la influencia de diferentes combinaciones de selectividad de columna micro LC y fase estacionaria de trampa en el rendimiento cromatográfico, la recuperación de muestras y la selectividad. Comparamos las columnas micro LC en una dimensión de columna de 50 x 0.3 mm empaquetadas con tres químicas de fase estacionaria de LC diferentes: Kinetex®, Luna® PS C18 y Luna Omega Polar C18.
La comparación se generó utilizando una muestra de 20 péptidos marcados con isótopos estables (SIL) bajo condiciones generales de fase móvil en fase inversa y detección MS/MS utilizando un SCIEX® 5500 QTRAP®. Esta aplicación pone de manifiesto las diferencias en el rendimiento cromatográfico y la recuperación cuando se combinan diferentes combinaciones de columna micro LC y selectividad de la trampa en el modo de trampa y elución. El ajuste de la combinación de selectividad de la columna y la trampa es una herramienta útil de desarrollo de métodos para la optimización de su separación de micro de LC.
En la Figura 2, la MicroTrap Polar en combinación con la columna Kinetex XB-C18 proporciona la mayor recuperación de área de pico para este ejemplo. La combinación específica y las diferencias entre los medios de la columna y de la trampa pueden dar lugar a diferencias en la recuperación relativa, como se ve en las figuras 3 y 4. La diferencia relativa en la recuperación ilustra la importancia de optimizar las combinaciones de selectividad de las columnas micro LC y de las trampas, y demuestra cómo el uso de diferentes combinaciones de selectividad puede mejorar las recuperaciones dependiendo de las características químicas de sus compuestos de interés. La Figura 3 ilustra las mejoras de recuperación que pueden obtenerse variando la selectividad entre la columna y la trampa. Generalmente, a diferencia de las columnas de protección, una diferencia de medios entre los dos dispositivos de separación puede tener ventajas.
Al igual que en la LC a escala analítica, el rendimiento y la optimización de su separación se ven afectados por la química de la fase estacionaria elegida. La combinación específica de columna y medios de trampa puede dar lugar a diferencias en la recuperación relativa y el rendimiento de la separación, como se muestra en las figuras 5 y 6. En la Figura 5, la combinación de MicroTrap Polar y Kinetex XB-C18 produjo el área de pico media más alta. Sin embargo, la combinación de MicroTrap PS y Kinetex XB-C18 proporcionó la mejor forma de pico y rendimiento de recuperación para esta separación dada, como se ve en la Figura 7. Esta aplicación demuestra las diferencias de rendimiento entre las diferentes configuraciones de selectividad de la columna y la trampa y el impacto en la optimización del rendimiento de su separación de micro de LC.
Para explorar la solicitud técnica original completa, haga clic aquí o en la siguiente imagen.
Si le ha gustado este artículo, creemos que le interesará otro artículo centrado en “How to Improve Your Micro LC Column’s Performance.” (“Cómo mejorar el rendimiento de su columna micro LC”).
Si tiene alguna pregunta sobre cualquiera de la información contenida en este artículo o cualquier otra consulta técnica, puede conectarse al instante con nuestros expertos técnicos a través de nuestro servicio gratuito en línea: Chatear ahora.
¡Haga clic en el enlace para empezar a chatear hoy mismo! CHATEAR AHORA
