La eficiencia de la columna es un equilibrio entre la ejecución de sus métodos de forma rápida sin comprometer la calidad de la separación. Cuando un análisis por HPLC se efectua rápidamente, tiene más tiempo disponible para ejecutar más métodos, lo que al final le ahorra tiempo de inactividad del sistema y costos en general. Afortunadamente, existen tres simples maneras de aumentar la velocidad de un método por HPLC, manteniendo a la vez los resultados de alta calidad.
Estos incluyen lo siguiente:
Longitud de la columna HPLC
Esta es probablemente la mejor manera de aumentar la velocidad de su método. Cuanto más corta es la columna de HPLC, menor será el tiempo de análisis, lo que significa que es posible analisar más muestras en menos tiempo. Sin embargo, cuanto más corta sea la longitud de la columna, menor será la resolución del pico. Por este motivo, es de vital importancia equilibrar la longitud de la columna con la resolución para asegurar óptimos resultados.
Afortunadamente, es posible mantener la resolución, aún cuando se reduce la longitud de la columna. La clave es asegurarse de que se cumplan los requerimientos del análisis, que se separen los picos principales y que se seleccione la partícula de alta eficiencia apropiada para lograrlo.
Tamaño de partícula
Cuanto menor sea el tamaño de las partículas de la fase estacionaria, de mayor eficiencia y sensibilidad será la columna de cromatografía líquida de ultra alto rendimiento (U/HPLC). Tenga en cuenta que cuanto más pequeño sea el tamaño de las partículas, más alta será la contrapresión en el sistema, de modo que, nuevamente, esto significa encontrar un equilibrio entre qué separación debe lograr y el tamaño de la partícula, la longitud de la columna y la contrapresión que se seleccione para esa separación.
Una manera de abordar directamente el aumento de la presión en el sistema de HPLC es utilizar partículas de núcleo-coraza (core-shell). Estas partículas están compuestas de un núcleo sólido que está cubierto con una coraza exterior de alta porosidad. Estas funcionan igual que las partículas pequeñas para aumentar la eficiencia y velocidad del sistema, sin aumentar la presión del sistema.
Caudal de la fase móvil
Otra manera de incrementar la velocidad de su método de HPLC es aumentando el caudal de la fase móvil. Cuando aumenta el caudal de la fase móvil, los analitos se mueven más rápidamente a través de la columna, haciendo que el tiempo de análisis sea más corto.
Nuevamente, dado que un aumento del caudal puede reducir la eficiencia de la columna, es importante determinar el caudal óptimo capaz de aumentar la velocidad del sistema, sin comprometer la eficiencia de la columna. Esto se puede hacer graficando el caudal y la efciciencia de la columna en una gráfica de Van Deemter.
En última instancia, cuando la velocidad del análisis de HPLC aumenta, se pueden analizar más muestras por día, optimizando la productividad general del laboratorio. La clave es no sacrificar la eficiencia de la columna ni la resolución del pico en nombre de la velocidad, sino equilibrar cuidadosamente la longitud de la columna, el tamaño de las partículas y el caudal de la fase móvil.
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