Preparar las muestras puede parecer una tarea básica y rutinaria, pero se encuentra en el centro de sus análisis de cromatografía líquida de alto rendimiento (high performance liquid chromatography, HPLC). Contar con métodos analíticos robustos, confiables y precisos para el análisis de HPLC y cromatografía de gases (gas chromatography, GC) depende en gran medida de una buena preparación de las muestras. Con esto en mente, discutiremos las ventajas de una buena preparación de muestras, pero primero, es importante conocer los fundamentos de una preparación adecuada de las muestras.
Preparación adecuada de las muestras
Una muestra bien preparada requiere lo siguiente:
Asegúrese de que todas las sustancias químicas, reactivos y muestras sean manejadas adecuadamente
Las muestras deben manejarse con absoluta precisión y cuidado desde el momento en que ingresan al laboratorio, asegurándose de que permanezcan intactas y se mantengan a salvo de contaminación. Por lo tanto, todas las sustancias químicas, reactivos y muestras se deben manipular con cuidado, utilizando métodos que prevengan cualquier contaminación. Un ejemplo es extraer solventes de los frascos de solventes. Es una buena práctica evitar el uso de pipetas que pueden ser un punto de contaminación en todo el frasco de solventes, en su lugar, vierta el solvente directamente en un vaso de precipitado directamente del frasco.
Utilice material de vidrio y solventes que mejor se adapten a las necesidades del método
Elegir el material de vidrio adecuado para la preparación de muestras incluye elegir matraces aforados y pipetas que tengan la más alta tolerancias y precisión. Asegúrese de que los materiales de vidrio estén en buenas condiciones y de que las marcas de volumen estén intactas y claramente visibles, con el fin de evitar cualquier error de medición manual.
Evitar mezclar solventes en un matraz aforado
Cuando se mezclan solventes acuosos y no acuosos, sus volúmenes pueden cambiar. Si se mezclan en un matraz aforado, puede dar como resultado un volumen incorrecto. En su lugar, es mejor mezclar los solventes en otro matraz o vaso de precipitado y luego medir el volumen correcto utilizando el matraz aforado.
Utilizar técnicas de preparación de muestras basadas en los conceptos de la cinética y el equilibrio
La precisión es clave. Asegúrese de que todas las muestras se sometan exactamente a las mismas técnicas de preparación de muestras. Por ejemplo, cada muestra se debe agitar durante el tiempo suficiente para que se produzca la partición; luego se debe dejar el tiempo suficiente para que alcance el equilibrio dentro de cada fase. Un agitador mecánico es la mejor manera de hacerlo, ya que eso introduce consistencia en la preparación de las muestras.
Con esto en mente, cualquier técnica de preparación de muestras debe realizarse con absoluta precisión. Esto incluye QuEChERS, extracción de fase sólida (solid-phase extraction, SPE), extracción sólido-líquido (solid-liquid-extraction, SLE), precipitación de proteínas (protein precipitation, PPT), extracciones líquido-líquido (liquid-liquid extractions, LLE), y análisis de espacio superior (HS).
Ventajas de una preparación adecuada de las muestras
Si bien las diferentes guias mencionadas para la preparación de muestras parecen básicas, son críticas al momento de lograr reproducibilidad, selectividad y sensibilidad.
- Reproducibilidad: cuando las muestras están bien preparadas, será consistente, medible y repetible. Esto significa que puede llevar a cabo múltiples análisis y será capaz de reproducir los mismos resultados cada vez.
- Selectividad: Siguiendo las pautas de preparación de muestra mencionadas anteriormente aumentará la selectividad de sus mezclas de muestra, asegurando que pueda identificar y separar analitos específicos sin interferencia, de los componentes de la matriz de muestra.
- Sensibilidad: Cuando la muestra se prepara correctamente, los contaminantes que causan la supresión de iones son eliminados de la muestra, mejorando la relación señal ruido y llevando a una sensibilidad más alta para la detección de analitos.
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